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阿维菌素类药物酶联免疫试剂盒质量标准

浏览次数: 日期:2012-07-10

 

本品系用阿维菌素药物偶联蛋白的抗原、阿维菌素类药物多克隆抗体和酶标记羊抗兔及其它试剂制成。用于定量、定性检测牛组织中阿维菌素类药物的残留量。

【物理性状】 试剂盒外观完整,内装试剂齐全。包被抗原的酶联板透明干燥且用真空包装。阿维菌素类药物抗体工作液、底物液、终止液、阿维菌素标准品溶液、浓缩洗涤液、浓缩复溶液为透明溶液,酶标记物为浅黄色溶液,试剂无菌检验均应合格。

【灵敏度测定】 取已包被好的酶标板12孔,每两孔分别加入0?g/L0.5?g/L1.5?g/L4.5?g/L13.5?g/L40.5?g/L标准溶液各20?L,再加入抗体工作液80?L,用盖板膜盖板,37℃环境中反应30min,取出用洗涤液按每孔250μL,洗板45次,每次浸泡10秒,用吸水纸拍干,加入100?L酶标二抗,37℃反应30 min,取出洗板5次,拍干。加入底物液各50?L,避光37℃反应15 min,用50?L终止液终止反应,置450nm波长处测定吸光度值。每一浓度标准溶液吸光度值(B)平均值除以第一个标准(0标准)吸光度值(B0)的平均值再乘以100%,即百分吸光度值。以AVM浓度(?g/L)的自然对数值为X轴,百分吸光度值为Y轴,绘制标准曲线图。

IC50(即0浓度标准溶液的吸光度值50%处所对应的AVM浓度)范围应在2.32?g/L ~4.57?g/L之间。

【特异性测定】 取已包被好的酶标板18孔,每两孔分别加入0?g/L0.5?g/L1.5?g/L4.5?g/L13.5?g/L40.5?g/L标准溶液和牛肉样品提取液、20?g/L50?g/L两个浓度阿维菌素添加的牛肉样本提取液各20?L,再加入抗体工作液80?L37℃反应30min,取出洗板5次,拍干,加入100?L酶标二抗,37℃反应15 min,取出洗板5次,拍干。加入底物液各50?L,避光37℃反应15 min,用50?L终止液终止反应,置450nm波长处测定吸光度值。每一浓度标准溶液吸光度值(B)平均值除以第一个标准(0标准)吸光度值(B0)的平均值再乘以100%,即百分吸光度值。以AVM浓度(?g/L)的自然对数为X轴,百分吸光度为Y轴,绘制标准曲线图。从标准曲线中查出阴性样品和20?g/L 50?g/L两个浓度阿维菌素添加的组织样品的测定浓度。

阴性样品测定值在3?g/L以下,以20?g/kg 50?g/kg 两个浓度阿维菌素样本进行添加,回收率应在60.0%~120.0%以上。

【精密度测定】 取已包被好的酶标板32孔,每两孔分别加入0?g/L0.5?g/L1.5?g/L4.5?g/L13.5?g/L40.5?g/L标准溶液20?L,其它20孔加入4.5?g/L的标准溶液20?L,再加入抗体工作液80?L37℃反应30min,取出洗板5次,拍干,加入100?L酶标二抗,37℃反应30 min,取出洗板5次,拍干。加入底物液各50?L,避光37℃反应15 min,用50?L终止液终止反应,置450nm波长处测定吸光度值。

20个微孔的4.5?g/L标准溶液的光吸收值变异系数(%)应≤25%n=20

【适用范围】 用于定量、定性检测牛组织(肌肉、肝脏)中阿维菌素类药物的残留量。

【用法和结果判定】

1. 溶液配制

1.1 稀释复溶液:将2X浓缩复溶液摇匀,用水以12比例稀释,临用前配制。

1.2 稀释洗涤液:将20X浓缩洗涤液摇匀,用水以120比例稀释,临用前配制。

2. 样品前处理

2.1 牛组织(牛肉、牛肝)样本处理方法

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